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菌种制作基础知识:双孢蘑菇制种技术
作者:    来源:本网整理    点击数:   更新时间:2010年08月21日 【字体:

  本文系统的介绍了食用菌菌种制作的基础理论,适合初学者提升理论基础,具体操作方面其它品种可借鉴之。共分6个章节:第一节 培养基的制备 第二节 消毒与灭菌 第三节 菌种分离 第四节 菌种的生产 第五节 菌种质量鉴定与复壮 第六节 菌种保藏 可点击链接直接进入浏览。

  第一节 培养基的制备

  一、配制原则和种类

  (一)培养基配制原则

  1、培养基

  培养基是提供食用菌等生物生长发育所需的营养与特定环境条件的基质,如蘑菇菌是有机营养型中的草腐生菌。制备培养基不仅要考虑它所需要的含碳化合物、含氮化合物、矿物盐类、生长因子,还要考虑水与pH环境,同时还应考虑它们培养方式是固体培养还是液体培养。因此,可以把按菌类生长发育需要比例配制的灭菌营养基质,称为培养基。换言之,培养基必须具备三个条件:含有菌株生长发育所需要的营养物质;具有菌类生长环境条件;经过灭菌,并保持无菌状态。

  2、培养基的选择

  在整菌种制备过程中,从母种原种栽培种,各个阶段的目的要求有所不同,所选用的培养基的配比也应有所区别。一般母种初生菌丝较嫩弱,分解养分能力差,要求营养丰富、完全,氮源、维生素的比例应高。须选用易于被菌丝吸收利用的物质,如葡萄糖、蔗糖、马铃薯、蛋白胨、无机盐类及生长素等为等而原种、栽培种所需数量较多,且菌丝分解能力强,可利用大量农作物秸秆、粪草、棉籽壳、麸皮、米糠等原料作为培养基。

  (二)培养基的种类

  1、根据营养物质的来源,可以把培养基分炎天然培养基、半合成培养基和合成培养基。

  ①、天然培养基

  天然培养基是指用化学成分还不清楚或化学成分不恒定天然有机物配制而成的培养基,如各种农副产品及其下脚料-小麦、大豆、玉米粉、麸皮、米糠、作物秸秆、木屑、棉籽壳、甘蔗渣等,以及动植物组织的浸出液-牛肉膏、肉汤、马铃薯汁、麦芽汁、豆芽汁等都可以用来配制天然培养基,这种培养基来源广,成本低,营养丰富,适合于在生产上大规模培养菌类使用,但这些天然有机物质因产地、品种、生长期的不同,化学成分不能宣。每批成分也不稳定,不宜用来做精细的科学实验。以分离驯化食用菌培养基

  ②、半合成培养基

  为了促进食用菌菌丝的生长发育,常在天然培养基中添加适量的无机盐类,或在合成培养基中添加适量的某些天然有机物,就成为半合成培养基。这类培养基种类繁多,应用广泛,也是生长菌种和实际栽培最常用的培养基。

  ③、合成培养基

  是指采用化学成分已知的有机物(碳水化合物、含氮化合物、有机酸类)或无机物配制而成的培养基。这类培养基组成和含量明确,价格较贵,一般用于在实验室范围内做有关营养、代谢、菌种鉴定等有关于食用菌的生理生化研究。

  2、根据培养基制成后的物理状态,可将培养基分为液体培养基、半固体培养基和固体培养基。

  ①、液体培养基

  根据食用菌所需的营养物质,扫一定比例配成营养液,叫液体培养基。液体培养基可进行营养源的筛选实验,以及生理生化方面如酶活力等研究,应用液体培养基生产的菌种也可在生产中进行使用。

  ②、固化培养基

  将各种营养成份按比例配制成营养液后,加入适量固化剂,如琼脂,即可配成固化培养基。利用这种斜面试管可保藏及扩大菌种,同时亦可制成各种平皿固化培养基分离菌种。

  ③、固体培养基

  利用各种富含纤维素和木质素的农林废弃物如木屑、棉籽壳、秸秆、玉米蕊等作为主要原料,再加入适量的米糠或麸皮和无机盐类制成固体培养基。该培养基可作为二、三、级菌种生产用的培养基,也可以用它制成发酵草粉保藏菌种用的培养基。

  二、一级种培养基

  一级种又称母种,其培养基一般用试管作为容器,所以又称试管斜面培养基,这类培养基又常用于菌种分离提纯,扩大,转管及菌种保存等,下面列举蘑菇菌种生产常用配方。

  1.马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)

  马铃薯(去皮) 200克 葡萄糖 20克 琼脂 18-20克 水1000亳升

  2.马铃薯综合培养基(CPDA)
  马铃薯200克 葡萄糖 20克 磷酸二氢钾 3克 硫酸镁 1.5克 维生素B1 0.05毫克 琼脂18-20克 水1000毫升

  3.马铃薯酵母膏培养基(PDYA)

  马铃薯200克 葡萄糖20克 酵母膏 1.5克 琼脂 18-20克 水1000毫升

  4.麸皮葡萄糖培养基

  麸皮 50-70克 葡萄糖 20克 琼脂 18-20克 水1000毫升

  5.堆肥浸汁葡萄糖培养基

  堆肥(干) 100克 葡萄糖20克 琼脂 18-20克 水1000毫升

  6.玉米粉综合培养基

  玉米粉 20-30克 葡萄糖 20克 磷酸氢二钾 1克 硫酸镁 0.5克 蛋白胨 1克 琼脂 18-20克 水1000毫升

  9.E.B.Lamberr 培养基

  葡萄糖 10克 硫酸镁 0.5克 磷酸二氢钾 1.9克 琼脂 20克 水1000毫升(适合于双孢蘑菇的担孢子萌发)

  三. 二、三级种培养基

  二、三级种培养基通常采用天然营养物质,如秸秆、棉籽壳、蔗渣等农作物废物,加适量的无机盐类等制成固体培养基,现将常用的培养基配方介绍如下。

  1.粪草培养基

  发酵麦秆72% 发酵牛粪粉20% 麸皮5% 糖1% 磷酸钙1% 石膏1% 含水量62-65% 适合二级种

  2.牛粪粉培养基

  发酵牛粪粉98% 碳酸钙2% 含水量62-65% 适合二级种

  3.棉籽壳培养基

  发酵棉籽壳97% 过磷酸钙1% 碳酸钙1% 石灰1% 适合二,三级菌

  4.羊粪培养基

  干羊粪98% 碳酸钙2% 含水量62-65% 适合二级种

  5.矿石培养基

  膨胀珍珠岩1450克 麸皮1650克 石膏粉200克 碳酸钙50克 水1650克 pH6.2-6.4 适合二级种生产

  6.谷粒培养基

  麦粒(小麦,大麦,燕麦,高梁等)97% 碳酸钙2% 石膏1% 含水量50-55% pH6.5- 7.0 适合二,三级种

  7.小麦稻谷培养基

  小麦88% 稻谷10% 碳酸钙2% 适合三级种

  8.小麦牛粪粉培养基

  小麦88% 牛粪粉10% 碳酸钙2% 适合三级种

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  常用计量单位符号 1、时间:d(天)、h(小时)、min(分)、s(秒)。 2、长度:km(千米)、m(米)、cm(厘米)、mm(毫米)。 3、面积:m2(平方米)、667m2(亩)、hm2(公顷)。 4、体积:m3(立方米)、L(升)、ml(毫升)、μl(微升)。 5、质量:t(吨)、kg(公斤 千克)、g(克)、mg(毫克)、μg(微克)。 6、浓度:mg/L、mg/kg(ppm,1×10-6)。

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