杨辉德 周袢焱 《现代农业科技》 2008年第04期
摘要 对鸡腿菌Cc168品种摇瓶培养的培养条件和对固体方法与和液体的方法制作的原种在栽培袋中的生长天数和长速进行计载和测定，结果表明，其适宜的条件为摇瓶培养振荡频率为70次/min；光照强度影响不大，但以无光为宜；含糖度在1.0%~3.5%范围内，数值越大菌丝干重越重，但糖消耗率在3%上下；最适pH值在5～6之间；用液体菌种作种比固体菌种作种的生长速度明显加快。
关键词 鸡腿菌；摇瓶培养；菌丝干重；培养条件
中图分类号 S646文献标识码A文章编号1007-5739（2008）04-0007-01
采用摇瓶培养食用菌菌种，具有生产条件稳定、菌丝体的菌龄整齐一致、生产周期短、产量高、成本低、污染少等优点，是食用菌业实现机械化、自动化的基本保证，也是食用菌行业规模化和产业化生产的发展方向。
鸡腿菇是继平菇之后在全国范围内商业化栽培的又一个食用菌主干产品，目前鸡腿菇菌种的生产主要采用聚丙烯塑料袋装入固体基质培养经灭菌接种而成，但由于固体培养菌丝吃料速度较慢，从接种到满袋约需要28～35d，生产周期长，无形中增加了菌种的污染率，且袋口与袋底菌龄相差在20d以上，从而影响了菌种的质量。而鸡腿菇液体菌种生产具有周期短、菌龄整齐一致的优点；但是也存在菌种保存期短等问题。笔者近几年来一直在摸索将固体菌种和液体菌种的优点结合在一起的方法，以使液体菌种生产技术优势和经济优势一并发挥。本试验对鸡腿菇菌种摇瓶培养的生长条件和在栽培方面的优势进行了初步研究。
1 材料与方法
1.1 供试菌种
鸡腿菇品种Cc168，由华中农业大学食用菌中心提供。
1.2 培养基
1.2.1 固体培养基
①马铃薯黄豆芽葡萄糖琼脂斜面培养基：用于母种保藏；
②棉籽壳培养基：棉籽壳92%、麸皮5%、蔗糖1%、碳酸钙2%。
先将干物质拌匀后，再与自来水充分拌匀，覆膜堆闷5～6h，料水比为1∶1.25，用45cm×22cm聚丙烯塑料袋和750mL菌种瓶装料，按常规方法灭菌后接种。
1.2.2 液体培养基
半合成液体培养基：麸皮3%、玉米粉1%、黄豆粉0.5%、KH2PO4 0.15%、MgSO4·7H2O 0.1%，以蔗糖作碳源，改变其在培养基中的含量，构成不同的碳氮比，浓度分别为1.0g/mL、1.5g/mL、2.0g/mL、2.5g/mL、3.0g/mL和3.5g/mL。
1.3 培养方法和条件
1.3.1 摇瓶培养
在250mL三角瓶中，装液体培养基50mL，在 1.1×105 Pa压力下灭菌30min，接入活化的斜面母种0.5cm2，置于摇床上，于25℃条件下培养6d备用。用MP250-1（感量0.01g）电子天平，按配方准确配制碳氮比不同的培养液，用PHS-29A型酸度计测培养液酸碱度，用0.1 mol/L HCl和NaOH调节pH值，用移液管吸取100mL培养液装入500mL三角瓶中，灭菌后每瓶接入1mL已培养好的液体菌种，用黑色、白色布套、空白分别套在三角瓶上，以控制不同的光照强度，放入自动显示振荡频率的HZO-XL型恒温振荡培养箱中，在25℃条件下培养6d，收获菌丝球，重复3次。然后测定菌丝球的干重。
1.3.2 菌丝干重的测定
将培养液经40目尼龙筛网过滤，菌丝球用蒸馏水冲洗数次后，在80℃下烘干至恒重，称100mL液体培养液中的菌丝干重（g/100mL）。
1.3.3 分组对比试验
将前述装棉籽壳培养料灭菌后的瓶和袋放入接种室。750mL广口瓶制作原种，用45cm×22cm塑料袋作出菇袋，分别接入液体菌种（试验组）和固体菌种（对照组）。液体菌种接入量：广口瓶接入量为原种5mL/瓶；出菇袋接入量25mL/袋。固体菌种接入量：每支母种接5瓶原种，原种满瓶后，每瓶原种接15只出菇袋，每个处理为1组，每组10个重复，然后放置在25℃恒温条件下培养并作观察与测试。
1.4 观察与测试
1.4.1 用酸度计测定培养液pH值，用糖度计测定培养液含糖量。
1.4.2 测定鸡腿菇菌丝每天生长的长度，记录从接种的当天到长满的天数，测定时以菌丝在瓶或袋内全部盖住棉籽壳培养基为依据。
1.4.3 观察菌丝球的形状、大小和数量、培养液的色泽、培养液的气味和清澈度。
2 结果分析
2.1 不同振荡频率与光照强度对鸡腿菇菌丝生长的影响
摇瓶培养振荡频率分别为50次/min、70次/min、90次/min，光照强度分无光、弱光、强光3个不同处理，恒温振荡培养6d，结果见表1。从表1中看出，振荡频率对摇瓶培养鸡腿菇菌丝生长的影响最大，振荡频率70次/min时，菌丝体大量形成菌丝球，菌丝生长良好，菌液清，密度大；在90次/min时，菌丝分散，菌液较混，密度小，不能形成菌丝球，生长量明显减少。光照强度对菌丝生长影响不大，但黑暗较弱光、室内散射光更能满足菌丝生长的要求。
2.2 不同含糖度对鸡腿菇菌丝干重的影响与菌丝生长对糖的消耗
配制含糖度分别为1.0%、1.5%、2.0%、2.5%、3.0%、3.5%的6个不同水平的培养液，在25℃条件下接种培养6d后测定培养液的含糖度，检查鸡腿菇生长中对糖的消耗，结果见表2。试验表明，接种前后培养液的糖消耗率3%左右，说明鸡腿菇菌丝生长对糖消耗受培养液含糖度的影响不大；但菌丝干重与培养液含糖度呈正相关。
2.3 不同梯度的pH值培养液对菌丝生长的影响
配制pH值为2、3、4、5、6、7、8不同梯度的培养液，在25℃条件下摇瓶培养6d测培养液pH值，检查生长后培养液pH值的变化，结果见表3。试验表明，培养液pH值对菌丝生长影响很大，对比接种培养前后培养液pH值的变化情况，发现鸡腿菇接种在不同pH值梯度的培养液中培养，最后都将培养液pH值调至6.5左右。表明鸡腿菇菌丝代谢具有调整pH值的功能，菌丝在pH值3～8都能生长，生长最适pH值为5～6。
2.4 不同菌种在原种瓶与栽培袋中的对比试验
按前述每组10次重复，记载菌丝长满时间，取10次重复的平均值，按天计算，结果见表4。结果表明，摇瓶菌种较固体菌种在固体基质上能多点萌发，菌丝可多方向延伸，生长均匀、快速，能提早8～10d满瓶（袋），生长速度在原种瓶要快0.425cm/d，在栽培袋快0.406cm/d，使用摇瓶菌种接种固体基质制作的原种，能兼具液体菌种和固体菌种的优点。
3 参考文献
[1] 马瑞霞，姚献华，魏志华.白色金针菇液体菌种生产技术研究[J].中国食用菌，2005（6）：16-17.
[2] 郭树凡，张慧丽.香菇液体菌种生产技术研究[J].中国食用菌，2005（1）：38.
[3] 何野，张小平，谭伟，等.长根菇液体培养条件的研究[J].中国食用菌，2005（6）：16-17.
[4] 曾东方，张小朋，罗雪莲，等.三种药用灵芝摇瓶发酵营养生理的比较研究[J].中国食用菌，2005（3）：52.
