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共生食用菌松茸菌丝体液体发酵的研究
作者:李云 曾东方    来源:《食品与药品·A版》 2007年第05期    点击数:   更新时间:2008年04月16日 【字体:

  摘要:目的研究松茸菌丝体液体发酵方法和最佳条件。方法经RAPD-PCR 分析确认松茸菌丝体菌种,研究松茸液体深层发酵过程中菌丝体的生物量、残糖浓度和pH随时间变化的过程;比较不同种龄对菌丝体积累的影响,确立最佳接种种龄;比较不同初始糖浓度发酵过程的结果,运用中间补糖的方法,确定最优的补糖时间。结果最佳接种种龄为6 d;初始糖浓度较低有利于缩短松茸种子液生长的延迟期,较高则可使菌丝体在较长时间保持生长并获得较高的生物量产出。d 12 为最优补糖时间,在摇瓶体系中培养24 d最终得到12.77 g/L的菌丝体生物量。结论最佳培养条件下,采用中间补糖法适合液体发酵过程中松茸菌丝体的积累。
 
  关键词:松茸;菌丝体;种龄;补料培养;液体发酵

  松茸(Tricholoma matsutake)是与松树共生的珍稀食、药用外生菌根真菌,有很高的营养价值和特殊的药用效果。由于野生松茸资源已经日渐枯竭,人工培养尚无法获得松茸的子实体,因此液体深层培养松茸菌丝体,提取生理活性物质并进行深加工越来越受到关注。目前对松茸菌丝体培养的研究主要集中在松茸菌丝的营养生理、液体条件下培养基成分的优化以及培养条件的考察等方面[1-3]。本实验采用了经RAPD-PCR 分析确认的松茸菌丝体菌种,研究了松茸在摇瓶中液体条件下各生长参数的动态变化。发酵过程中采用中间补料的方法,获得了较高的菌丝体生物量,为大规模液体深层发酵生产提供了依据。
  
  1材料与方法
  
  1.1菌种来源
  采集我国东北延边地区产的松茸子实体,经组织分离获得菌丝体。纯培养后,经RAPD-PCR(随机引物聚合酶链反应) 分析DNA进行亲菌鉴定,确认为松口蘑菌丝体菌种[4]。

  1.2培养基
  PDA 培养基用于斜面菌种培养。液体种子培养基(g/L)是葡萄糖20 , 酵母浸粉1,蛋白胨2,NH4Cl 1,KH2PO4 0.5,MgSO4·7H2O 0.5,维生素B1 0.05,pH自然;发酵培养基(g/L)是葡萄糖(据实验要求而定),酵母浸粉2,蛋白胨2,KH2PO4 0.5,MgSO4·7H2O 0.5,维生素B1 0.05,pH 5.0。
  1.3方法
  1.3.1培养方法液体种子培养:用直径10 mm的打孔器将生长旺盛的固体琼脂菌苔切成大小一致的菌块,接种灭菌后的液体种子培养基,菌块要薄以使其漂浮在液面上。用500 mL 三角瓶,装液量100 mL ,22 ℃,50 r/min条件下摇床避光培养。
  发酵培养:用250 mL 三角瓶,装液量50 mL,液体菌种接种量10 %(去除种子培养液中的固体菌丝块和碎片),22 ℃,70 r/ min 条件下摇床避光培养。
  取样测定:在每个取样期取3瓶样品做平行测定,以平均值作为测定结果。
  1.3.2测定生物量40目尼龙滤网过滤培养液,分离菌丝体和发酵液。菌丝体经去离子水冲洗数次,60 ℃恒温烘干至恒重,分析天平称重。测定发酵液pH值及残糖浓度。
  1.3.3测定残糖浓度费林试剂法每组平行测定6~8次后取平均值。
  1.3.4显微观察菌丝体取发酵液于载玻片上,乳酸苯酚棉蓝染色涂片,光学显微镜下观察。

  2结果
  
  2.1最佳种龄
  以相同的接种和培养条件,分别选取种龄为6,9,11 d 的液体种子,接种于摇瓶发酵培养,测定发酵过程中生物量、残糖和pH的变化,结果见图1、图2。

 
  
  图1 种龄对菌丝体生物量和残糖变化的影响

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  常用计量单位符号 1、时间:d(天)、h(小时)、min(分)、s(秒)。 2、长度:km(千米)、m(米)、cm(厘米)、mm(毫米)。 3、面积:m2(平方米)、667m2(亩)、hm2(公顷)。 4、体积:m3(立方米)、L(升)、ml(毫升)、μl(微升)。 5、质量:t(吨)、kg(公斤 千克)、g(克)、mg(毫克)、μg(微克)。 6、浓度:mg/L、mg/kg(ppm,1×10-6)。

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